布鲁氏菌病实验室检测技术

附录六 病原体多重核酸高通量检测实验步骤（湿实验）

附录五 样本处理流程

三、液体保存的菌种复苏

二、布鲁氏菌菌种保存

一、布鲁氏菌（标本）的运输

附录四 布鲁氏菌菌种运输、保藏及复苏

十四、硫堇、碱性复红滤纸片制备

十三、硝酸铅滤纸条制备

十二、结晶紫原液配制

十一、胰酪大豆胨液体培养基配方

十、酪胨琼脂培养基

九、硫乙醇酸盐流体培养基

八、布鲁氏菌选择培养基

七、血清葡萄糖培养基

六、双相培养基

五、布鲁氏菌半固体培养基

四、布鲁氏菌肉汤培养基

三、布鲁氏菌琼脂斜面培养基

二、布鲁氏菌琼脂平板培养基

一、布鲁氏菌基础培养基（商品布鲁氏菌琼脂培养基按商品说明书配制）

附录三 试验材料、试剂制备

二、消毒与灭菌

一、BSL-3实验室个人防护措施

附录二 布鲁氏菌生物安全实验室操作规范

附录一 布鲁氏菌病实验室检测的相关标准性文件

附录

五、小鼠半数致死量的确定LD50

四、豚鼠/小鼠全身最小感染量的测定

三、小鼠体内持续期试验

二、豚鼠脾脏载菌量的测定

一、安全检验

第三节 动物实验

三、虎红平板凝集试验和布鲁氏菌iELISA联合检测血清抗体

二、虎红平板凝集试验和布鲁氏菌ELISA联合检测血清抗体

一、PCR检测

第二节 鉴别检验

六、真空度测定

五、剩余水分测定

四、活菌计数

三、变异检验

二、纯粹检验

一、性状检验

第一节 成品检验

第四章 布鲁氏菌病疫苗质量控制及评价技术

九、结果判定

八、试验成立条件

七、实时荧光PCR反应程序

六、实时荧光PCR反应体系

五、细菌基因组提取

四、样品处理

三、引物和探针序列及其应用

二、试剂

一、器材

第八节 疫苗株和野毒株的鉴别

三、相关试剂配制

二、MALDI-TOF MS鉴定布鲁氏菌

一、技术简介及原理

第七节 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定布鲁氏菌

六、wgSNP代表株及进化树示例（表3-15，图3-8）

五、全基因组测序技术在布鲁氏菌病疫情防控中的作用

四、全基因组数据应用

三、操作方法

二、仪器及试剂

一、布鲁氏菌二代测序的样本要求

第六节 布鲁氏菌的全基因组测序分析

二、测序分析

一、标本采集及运输要求

第五节 布鲁氏菌的宏基因组测序分析

三、操作方法

二、仪器及试剂

一、原理

第四节 布鲁氏菌基因分型

二、实时荧光PCR

一、AMOS聚合酶链式反应（AMOS-PCR）

第三节 布鲁氏菌种型鉴定

五、基于CRISPR/Cas系统的布鲁氏菌核酸检测方法

四、等温扩增检测技术

三、数字PCR

二、实时荧光PCR

一、BCSP31聚合酶链式反应（BCSP31-PCR）

第二节 布鲁氏菌属的鉴定

第一节 核酸提取

第三章 分子生物学检测方法

五、意义

四、结果判断

三、操作方法

二、仪器及试剂

一、原理

第三节 药敏试验

二、自动化技术

一、传统方法

第二节 布鲁氏菌的鉴定

二、动物组织材料样本的布鲁氏菌分离培养

一、人组织材料样本的布鲁氏菌分离培养

第一节 布鲁氏菌的分离培养

第二章 病原学检测方法

五、意义

四、结果判定

三、操作方法

二、器材与试剂

一、原理

第十一节 全乳环状试验

六、意义

五、结果判定

四、操作方法

三、试剂

二、仪器设备与耗材

一、原理

第十节 荧光偏振试验

六、意义

五、结果判定

四、操作方法

三、五种成分的处理和滴定

二、器材及试剂

一、原理

第九节 补体结合试验

五、意义

四、结果判定

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第八节 半胱氨酸凝集试验

五、意义

四、结果判定

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第七节 抗球蛋白试验

四、意义

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第六节 微量凝集试验

五、意义

四、结果判定

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第五节 试管凝集试验

六、意义

五、结果的计算

四、操作方法

三、试剂

二、仪器设备与耗材

一、原理

第四节 间接酶联免疫吸附试验

五、意义

四、结果判断

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第三节 胶体金免疫层析试验

五、意义

四、结果判定

三、操作方法

二、器材及试剂

一、原理

第二节 虎红平板凝集试验

第一节 血清学检测样本的采集

第一章 抗体检测方法

前言

序

《布鲁氏菌病实验室检测技术》编写委员会

版权信息

封面

封面

版权信息

《布鲁氏菌病实验室检测技术》编写委员会

序

前言

第一章 抗体检测方法

第一节 血清学检测样本的采集

第二节 虎红平板凝集试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、结果判定

五、意义

第三节 胶体金免疫层析试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、结果判断

五、意义

第四节 间接酶联免疫吸附试验

一、原理

二、仪器设备与耗材

三、试剂

四、操作方法

五、结果的计算

六、意义

第五节 试管凝集试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、结果判定

五、意义

第六节 微量凝集试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、意义

第七节 抗球蛋白试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、结果判定

五、意义

第八节 半胱氨酸凝集试验

一、原理

二、器材及试剂

三、操作方法

四、结果判定

五、意义

第九节 补体结合试验

一、原理

二、器材及试剂

三、五种成分的处理和滴定

四、操作方法

五、结果判定

六、意义

第十节 荧光偏振试验

一、原理

二、仪器设备与耗材

三、试剂

四、操作方法

五、结果判定

六、意义

第十一节 全乳环状试验

一、原理

二、器材与试剂

三、操作方法

四、结果判定

五、意义

第二章 病原学检测方法

第一节 布鲁氏菌的分离培养

一、人组织材料样本的布鲁氏菌分离培养

二、动物组织材料样本的布鲁氏菌分离培养

第二节 布鲁氏菌的鉴定

一、传统方法

二、自动化技术

第三节 药敏试验

一、原理

二、仪器及试剂

三、操作方法

四、结果判断

五、意义

第三章 分子生物学检测方法

第一节 核酸提取

第二节 布鲁氏菌属的鉴定

一、BCSP31聚合酶链式反应（BCSP31-PCR）

二、实时荧光PCR

三、数字PCR

四、等温扩增检测技术

五、基于CRISPR/Cas系统的布鲁氏菌核酸检测方法

第三节 布鲁氏菌种型鉴定

一、AMOS聚合酶链式反应（AMOS-PCR）

二、实时荧光PCR

第四节 布鲁氏菌基因分型

一、原理

二、仪器及试剂

三、操作方法

第五节 布鲁氏菌的宏基因组测序分析

一、标本采集及运输要求

二、测序分析

第六节 布鲁氏菌的全基因组测序分析

一、布鲁氏菌二代测序的样本要求

二、仪器及试剂

三、操作方法

四、全基因组数据应用

五、全基因组测序技术在布鲁氏菌病疫情防控中的作用

六、wgSNP代表株及进化树示例（表3-15，图3-8）

第七节 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定布鲁氏菌

一、技术简介及原理

二、MALDI-TOF MS鉴定布鲁氏菌

三、相关试剂配制

第八节 疫苗株和野毒株的鉴别

一、器材

二、试剂

三、引物和探针序列及其应用

四、样品处理

五、细菌基因组提取

六、实时荧光PCR反应体系

七、实时荧光PCR反应程序

八、试验成立条件

九、结果判定

第四章 布鲁氏菌病疫苗质量控制及评价技术

第一节 成品检验

一、性状检验

二、纯粹检验

三、变异检验

四、活菌计数

五、剩余水分测定

六、真空度测定

第二节 鉴别检验

一、PCR检测

二、虎红平板凝集试验和布鲁氏菌ELISA联合检测血清抗体

三、虎红平板凝集试验和布鲁氏菌iELISA联合检测血清抗体

第三节 动物实验

一、安全检验

二、豚鼠脾脏载菌量的测定

三、小鼠体内持续期试验

四、豚鼠/小鼠全身最小感染量的测定

五、小鼠半数致死量的确定LD50

附录

附录一 布鲁氏菌病实验室检测的相关标准性文件

附录二 布鲁氏菌生物安全实验室操作规范

一、BSL-3实验室个人防护措施

二、消毒与灭菌

附录三 试验材料、试剂制备

一、布鲁氏菌基础培养基（商品布鲁氏菌琼脂培养基按商品说明书配制）

二、布鲁氏菌琼脂平板培养基

三、布鲁氏菌琼脂斜面培养基

四、布鲁氏菌肉汤培养基

五、布鲁氏菌半固体培养基

六、双相培养基

七、血清葡萄糖培养基

八、布鲁氏菌选择培养基

九、硫乙醇酸盐流体培养基

十、酪胨琼脂培养基

十一、胰酪大豆胨液体培养基配方

十二、结晶紫原液配制

十三、硝酸铅滤纸条制备

十四、硫堇、碱性复红滤纸片制备

附录四 布鲁氏菌菌种运输、保藏及复苏

一、布鲁氏菌（标本）的运输

二、布鲁氏菌菌种保存

三、液体保存的菌种复苏

附录五 样本处理流程

附录六 病原体多重核酸高通量检测实验步骤（湿实验）