combined bisulfite restriction analysis（COBRA）　结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法

结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法主要用于检测目的DNA序列中含有的特殊酶切位点的甲基化状态。其基本原理是：先对样本DNA进行亚硫酸氢钠处理，处理后甲基化的胞嘧啶被保留，而非甲基化的胞嘧啶变为胸腺嘧啶。而后针对待测序列进行PCR扩增，随后用限制性内切酶对PCR产物进行切割。若限制性内切酶识别序列中的胞嘧啶被甲基化，则酶仍然能切割此位点；若没有被甲基化，则该酶在此位点不能进行切割。这样原始DNA甲基化水平就可通过酶切的与未酶切的PCR产物的相对数量来表示。